① 正相色谱柱的使用及清洗方法
使用方法:样品保持洁净,最好提前除掉不溶和强保留杂质,可以对样品进行一定的前处理如:SPE、过滤膜。同时对溶解度差的样品尽量采用固体上样法。
冲洗方法:1)对于污染物,首先采用醇类冲洗(甲醇、乙醇、异丙醇,推荐异丙醇)5-10倍柱体积,如无法除去可采用强洗脱溶剂(四氢呋喃、三氯甲烷等)5-10倍柱体积,最后再用醇类5-10倍柱体积将强洗脱溶剂冲出。最后用正己烷/异丙醇等正相体系保存,或吹干保存。
2)如正相柱被水污染,用异丙醇过渡除水10倍柱体积。
② C4快速分离柱的使用及保存方法
1)C4快速分离柱采用干法装柱,首次使用前须用100%甲醇冲洗至少20个柱体积,然后用流动相平衡10个柱体积;
2)流动相的pH值应保持在2.5-7.0之间;
3)正确保存C4快速分离柱以供多次使用,塞好端帽并保存于ACN/H₂O(80:20)或者MeOH/H₂O(80:20)中,如果体系中有缓冲盐,用不含缓冲盐的同比例流动相冲洗5-10个柱体积。
③ C8快速分离柱的使用及保存方法
1)C8快速分离柱采用干法装柱,首次使用前须用100%甲醇冲洗至少20个柱体积,然后用流动相平衡10个柱体积;
2)流动相的pH值应保持在2.5-7.0之间;
3)正确保存C8快速分离柱以供多次使用,塞好端帽并保存于ACN/H₂O(80:20)或者MeOH/H₂O(80:20)中,如果体系中有缓冲盐,用不含缓冲盐的同比例流动相冲洗5-10个柱体积。
④ C18快速分离柱的使用及保存方法
1)C18快速分离柱采用干法装柱,首次使用前须用100%甲醇冲洗至少20个柱体积,然后用流动相平衡10个柱体积;
2)流动相的pH值应保持在1.5-7.5之间;
3)正确保存C18快速分离柱以供多次使用,塞好端帽并保存于ACN/H₂O(80:20)或者MeOH/H₂O(80:20)中,如果体系中有缓冲盐,用不含缓冲盐的同比例流动相冲洗5-10个柱体积。
⑤ NH₂快速分离柱的使用及保存方法
1)NH₂快速分离柱既可以正相使用,也可以反相使用,需要注意:正相溶剂和反相溶剂是不互溶的,更换流动相时要确保新流动相与原保存液互溶;
2)使用时建议先用异丙醇以低流速冲洗30倍柱体积,再使用流动相平衡10倍柱体积;正相使用时不能用于分离含醛基、羰基化合物以及还原糖等;反相使用时要注意流动相PH值范围和水相比例的范围,PH越低、水相比例越高,越有水解的危险,建议PH在3.0-7.0;
3)NH₂快速分离柱的保存:正相使用时,将柱子冲洗干净后,用正己烷-乙腈(99:1)保存。反相使用时,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换,最后用正己烷-乙腈(99:1)保存。
⑥ ARG快速分离柱的使用及保存方法
1)ARG快速分离柱使用前先用50/50乙腈/水缓冲体系平衡色谱柱50倍柱体积,然后用起始流动相平衡20倍柱体积,进样间隔需要10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱;
2)流动相保持不少于5%水相溶液,有机相比例不低于40%,缓冲盐采用甲酸铵或者乙酸铵,不能使用磷酸盐缓冲盐以防缓冲盐析出;
3)样品配样溶剂建议采用甲醇和乙腈,不建议采用纯水或者DMSO溶解;
4)ARG快速分离柱若长时间不使用建议保存在95%乙腈中;如果体系中有缓冲盐,用不含缓冲盐的同比例流动相冲洗5-10个柱体积;
5)如果重复使用,再次使用前先用异丙醇低流速下冲洗20-50柱体积(流速以压力为参考,冲洗柱体积以前次使用状况为参考)然后按照首次使用方法去冲洗。
⑦ Diol快速分离柱的使用及保存方法
Diol分离柱如果用于正相分离,使用方法如下:
样品保持洁净,最好提前除掉不溶和强保留杂质,可以对样品进行一定的前处理如:SPE、过滤膜。同时对溶解度差的样品尽量采用固体上样法;
冲洗方法:a.对于污染物,首先采用醇类冲洗(甲醇、乙醇、异丙醇,推荐异丙醇)5-10倍柱体积,如无法除去可采用强洗脱溶剂(四氢呋喃、三氯甲烷等)5-10倍柱体积,最后再用醇类5-10倍柱体积将强洗脱溶剂冲出。最后用正己烷/异丙醇等正相体系保存,或吹干保存;
b.如正相柱被水污染,用异丙醇过渡除水10倍柱体积。
⑧ CN快速分离柱的使用及保存方法
1)CN快速分离柱既可以正相使用,也可以反相使用,需要注意:正相溶剂和反相溶剂是不互溶的,更换流动相时要确保新流动相与原保存液互溶;
2)使用时建议先用异丙醇以低流速冲洗30倍柱体积,再使用流动相平衡10倍柱体积;反相使用时要注意流动相PH值范围和水相比例的范围,PH越低、水相比例越高,越有水解的危险;
3)CN快速分离柱的保存:正相使用时,将柱子冲洗干净后,用正己烷-乙醇(95:5)保存。反相使用时,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换,最后用正己烷-乙醇(95:5)保存。