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● SepaFlash®快速制备液相色谱柱的正确清洗和使用方式
① 正相色谱柱的使用及清洗方法
使用方法:样品保持洁净,最好提前除掉不溶和强保留杂质,可以对样品进行一定的前处理如:SPE、过滤膜。同时对溶解度差的样品尽量采用固体上样法。
冲洗方法:1)对于污染物,首先采用醇类冲洗(甲醇、乙醇、异丙醇,推荐异丙醇)5-10倍柱体积,如无法除去可采用强洗脱溶剂(四氢呋喃、三氯甲烷等)5-10倍柱体积,最后再用醇类5-10倍柱体积将强洗脱溶剂冲出。最后用正己烷/异丙醇等正相体系保存,或吹干保存。
2)如正相柱被水污染,用异丙醇过渡除水10倍柱体积。
② C4快速分离柱的使用及保存方法
1)C4快速分离柱采用干法装柱,首次使用前须用100%甲醇冲洗至少20个柱体积,然后用流动相平衡10个柱体积;
2)流动相的pH值应保持在2.5-7.0之间;
3)正确保存C4快速分离柱以供多次使用,塞好端帽并保存于ACN/H₂O(80:20)或者MeOH/H₂O(80:20)中,如果体系中有缓冲盐,用不含缓冲盐的同比例流动相冲洗5-10个柱体积。
③ C8快速分离柱的使用及保存方法
1)C8快速分离柱采用干法装柱,首次使用前须用100%甲醇冲洗至少20个柱体积,然后用流动相平衡10个柱体积;
2)流动相的pH值应保持在2.5-7.0之间;
3)正确保存C8快速分离柱以供多次使用,塞好端帽并保存于ACN/H₂O(80:20)或者MeOH/H₂O(80:20)中,如果体系中有缓冲盐,用不含缓冲盐的同比例流动相冲洗5-10个柱体积。
④ C18快速分离柱的使用及保存方法
1)C18快速分离柱采用干法装柱,首次使用前须用100%甲醇冲洗至少20个柱体积,然后用流动相平衡10个柱体积;
2)流动相的pH值应保持在1.5-7.5之间;
3)正确保存C18快速分离柱以供多次使用,塞好端帽并保存于ACN/H₂O(80:20)或者MeOH/H₂O(80:20)中,如果体系中有缓冲盐,用不含缓冲盐的同比例流动相冲洗5-10个柱体积。
⑤ NH₂快速分离柱的使用及保存方法
1)NH₂快速分离柱既可以正相使用,也可以反相使用,需要注意:正相溶剂和反相溶剂是不互溶的,更换流动相时要确保新流动相与原保存液互溶;
2)使用时建议先用异丙醇以低流速冲洗30倍柱体积,再使用流动相平衡10倍柱体积;正相使用时不能用于分离含醛基、羰基化合物以及还原糖等;反相使用时要注意流动相PH值范围和水相比例的范围,PH越低、水相比例越高,越有水解的危险,建议PH在3.0-7.0;
3)NH₂快速分离柱的保存:正相使用时,将柱子冲洗干净后,用正己烷-乙腈(99:1)保存。反相使用时,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换,最后用正己烷-乙腈(99:1)保存。
⑥ ARG快速分离柱的使用及保存方法
1)ARG快速分离柱使用前先用50/50乙腈/水缓冲体系平衡色谱柱50倍柱体积,然后用起始流动相平衡20倍柱体积,进样间隔需要10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱;
2)流动相保持不少于5%水相溶液,有机相比例不低于40%,缓冲盐采用甲酸铵或者乙酸铵,不能使用磷酸盐缓冲盐以防缓冲盐析出;
3)样品配样溶剂建议采用甲醇和乙腈,不建议采用纯水或者DMSO溶解;
4)ARG快速分离柱若长时间不使用建议保存在95%乙腈中;如果体系中有缓冲盐,用不含缓冲盐的同比例流动相冲洗5-10个柱体积;
5)如果重复使用,再次使用前先用异丙醇低流速下冲洗20-50柱体积(流速以压力为参考,冲洗柱体积以前次使用状况为参考)然后按照首次使用方法去冲洗。
⑦ Diol快速分离柱的使用及保存方法
Diol分离柱如果用于正相分离,使用方法如下:
样品保持洁净,最好提前除掉不溶和强保留杂质,可以对样品进行一定的前处理如:SPE、过滤膜。同时对溶解度差的样品尽量采用固体上样法;
冲洗方法:a.对于污染物,首先采用醇类冲洗(甲醇、乙醇、异丙醇,推荐异丙醇)5-10倍柱体积,如无法除去可采用强洗脱溶剂(四氢呋喃、三氯甲烷等)5-10倍柱体积,最后再用醇类5-10倍柱体积将强洗脱溶剂冲出。最后用正己烷/异丙醇等正相体系保存,或吹干保存;
b.如正相柱被水污染,用异丙醇过渡除水10倍柱体积。
⑧ CN快速分离柱的使用及保存方法
1)CN快速分离柱既可以正相使用,也可以反相使用,需要注意:正相溶剂和反相溶剂是不互溶的,更换流动相时要确保新流动相与原保存液互溶;
2)使用时建议先用异丙醇以低流速冲洗30倍柱体积,再使用流动相平衡10倍柱体积;反相使用时要注意流动相PH值范围和水相比例的范围,PH越低、水相比例越高,越有水解的危险;
3)CN快速分离柱的保存:正相使用时,将柱子冲洗干净后,用正己烷-乙醇(95:5)保存。反相使用时,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换,最后用正己烷-乙醇(95:5)保存。
● SepaBeanmachine快速制备液相色谱系统的维护与保养
① 流动相的更换
分别填写样品信息、TLC信息(正相)、HPLC信息(反相)、分离参数,梯度可以自动生成,也可以手动修改。
· 正相换反相
A、B流动相同时换成异丙醇,以Flow Rate=30ml/min,冲洗10分钟,A、B流动相同时换成甲醇,以Flow Rate=30ml/min,冲洗10分钟,A流动相换成纯水,同样以Flow Rate=30ml/min,冲洗10分钟,这样可保证管路已冲洗干净。冲洗管路的同时要保证收集针头也要被清洗干净。
· 反相换正相 。
A、B流动相同时换成甲醇,以Flow Rate=30ml/min,冲洗10分钟,A、B流动相同时换成异丙醇,以Flow Rate=30ml/min,冲洗10分钟,A流动相换成石油醚,B流动相换成乙酸乙酯,同样以Flow Rate=30ml/min,冲洗10分钟,这样可保证管路已冲洗干净。冲洗管路的同时要保证收集针头也要被清洗干净。
② 保险丝的更换
保险丝更换过程如下:
1、关掉电源开关。
2、从电源插座上取下电源电缆。
3、用一字螺丝刀将保险丝后盖打开。
4、换上新保险丝后,推上保险丝盒盖
③ 硬件维护
1)清洗溶剂过滤器
将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下,将过滤器放在装有异丙醇的烧杯里超声清洗,再用水彻底冲洗过滤器
2)泵
泵是免维护无阀计量泵,不建议客户拆卸泵组件,仅可对泵相连的溶剂接头进行操作。
3)更换氘灯和钨灯
1、关闭仪器电源等待15-30min待光源冷却;
2、用内六角旋开侧面板的两个固定螺母取下面板,可看到整个检测器部件,逆时针松开固定装置检测器的托盘,小心拉出托盘至合适的位置,拔开氘灯和钨灯的电源线,用十字螺丝刀拧开固定氘灯和钨灯的螺母,小心抽出氘灯和钨灯(注意佩戴手套,勿用手触摸灯的玻璃窗)放置在干净的白纸上。
3、装入新的氘灯和钨灯,注意固定灯源的位置以及灯源发射窗孔的位置(见图),旋紧上下两个固定螺母,插上并归置好电源线。将托盘推回原位置,旋紧固定螺母,装上侧面板。
4、重新插上仪器电源和网线,开启仪器
4)清洗流通池
如果流通池污染或者堵塞,设置泵参数采用小流速溶剂冲洗,或者将流通池进出口管路拧开,接上两通接头,用注射器吸取对堵塞样品溶解度好的溶剂,慢慢冲洗,直到冲开。
5)维护保养计划
维护项目 周期
检查管路和接头,查看管路是否有褶皱 每星期,或者流速不准,接头有漏液以及管路有气泡的时候
更换管路和接头 每年
检查氘灯能量 每季度,或者检测器噪声大,灵敏度降低的时候
更换氘灯 当氘灯点不亮或者氘灯能量不能满足要求的时候
清洗流通池 每季度
确认溶剂瓶是否干净 每天
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