每当客户咨询关于制备纯化问题的时候，上样量是最关注的参数。在制备纯化中的上样量通常指在确保纯度和收率的条件下为了提高效率、降低耗材使用成本而得到的最大制备样品量。

那么决定制备纯化上样量因素有哪些呢?首先我们这里对上样量的概念进一步细化成：理论最大上样量和有效最大上样量。

理论最大上样量是指不考虑分离因素，仅仅考虑填料对样品的承受能力。对于不同色谱填料，构成不同、参数不同、分离作用原理不一样，单位重量的填料对样品的分离承受能力也不同。这里我们就拿制备纯化最常用的硅胶和硅胶基质反相C18的填料进行举例说明。这两种填料对分离作用影响最大的就是其表面的官能团，硅胶填料表面的官能团是羟基；硅胶基质反相C18的填料表面官能团是键合的C18基团，故而硅胶填料的分离承受能力和单位填料羟基官能团的多少有直接关系，同样硅胶基质反相C18填料的分离承受能力和单位填料C18基团的多少有直接关系。这里通常硅胶的理论最大上样量是硅胶量的1/10，硅胶基质反相C18填料的理论最大上样量是填料量的1/50。

而在实际分离过程中有很多因素影响我们上样情况，因此在实际分离过程中常用有效最大上样量，有效最大上样量是指通过实验所最终确认的制备上样量。这里就几个常见的因素进行讲解：1、样品的分离度2、样品的溶解度。

分离度对上样量的影响，主要是分离度的好坏决定是否要超载进样。当目标物和杂质分离度很好的情况下，我们就可以加大进样量即超载进样，随着进样量的增大，分离度变小，直至达到已经影响制备纯化得率和纯度要求。反之，如果分离度不好，就要酌情降低上样量来满足制备纯化得率和纯度要求。

溶解度对上样量的影响，主要是溶解度的好坏决定超载进样的方式。超载进样方式一般分为浓度超载和体积超载（如图1所示）。浓度超载指进样体积不变增加样品浓度，峰型从高斯曲线对称变为三角形，峰展宽较小，分离效果较好，因此在样品溶解性较好的前提下通常采用此种进样方式。而当样品溶解性较差时，通常增加进样体积，此种进样方式称为体积超载，当超过一定进样体积后，峰高将不再增加，峰型变宽并呈矩形。同时样品溶解度差的样品在分离过程还会出现析出现象造成柱压升高从而让我们不得不降低上样量。

 图1. 液相色谱中常用的不同进样方式。

那么你们在制备分离中还有哪些因素影响我们的上样量呢，欢迎大家与我们进一步的交流。

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