对于有机合成人员来说，无论手动过柱还是使用过柱机来纯化样品，都避不开对样品的前处理。有的样品比较简单，实验室常规试剂即可溶解完全直接液体上样，但是部分样品在如乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙腈等常用溶剂下没有理想的溶解度，这些样品在纯化时时如何上样？所以根据样品的性质及纯度不同，我们可以选择不同的上样方式，下面针对不同的上样方式适用的应用场景进行简单的讲述：
1、干法上样
干法上样在正相模式中特别常用，是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，加入样品量2-3倍量的硅胶，拌匀后再旋蒸除去溶剂。
一般当样品量较大或者溶解度较差时会采用干法上样，当样品单次上样量较大时会增加溶解样品的试剂量致使保留值降低。当样品溶解度较差时也建议用干法上样，样品可与硅胶等固定相充分吸附，特别是当样品需要用DMSO、DMF这类强洗脱溶剂时，干法上样可以先用强溶剂溶解再除去溶剂，避免样品被强洗脱剂先洗脱出去。
干法上样可以有效减轻纯化时拖尾的情况，尤其是在洗脱体系或其他弱极性溶剂中溶解度较小的样品，能够得到较窄的色带和峰形，且上样时平铺均匀，样品色带下降时也会平整。但是干法上样在样品前处理方面较繁琐费时，且注意拌样溶剂充分旋干，否则拌样强溶剂会将样品冲洗下来。
2、湿法上样
湿法上样是用少量的溶剂将样品溶解后直接用注射器推进色谱柱中的方法。样品若单次进样量少且在流动相中易溶解可直接用湿法上样。湿法上样的优点是不需要繁琐的前处理过程节省时间。但是局限性也很多，需要样品在洗脱体系中的溶解性要好，且用流动相中溶剂强度较弱的去溶解样品，否则会保留较弱，易被洗脱下来。
这两种上样方式的具体操作过程可以参考三泰科技公众号中的《FLASH色谱纯化产品小讲堂--SepaFlash标准型快速分离色谱柱》 。
3、反相制备失败——未后处理样品再次上样方式
上述两种上样方式大家几乎都知道，所以本文主要讲第三种方法，制备样品中我们经常会纯化失败，正相制备因为都是有机试剂，所以后处理较简单，旋蒸也比较快速，因此常采用将收集的样品直接旋蒸去除溶剂再次进行上样的方式。但是反相模式则不同，反相制备大部分情况下都有水，旋蒸温度低于60℃后处理很慢很费时间。那怎样才能有效的节省后处理时间再次直接上样呢？部分样品可按照下述方法进行上样：
（1）将样品收集合并在一起，倒入2-3倍纯水稀释有机溶剂或者旋蒸除去样品中的部分有机溶剂。
（2）将SepaFlash 球形C18（AQ）柱用纯水润柱。
（3）将A管路放进处理后的样品瓶里，软件系统设置A相：100%，将样品抽进反相柱中，同时用软件监测以防样品流出色谱柱。
（4）样品抽完后，停止软件监测，重新进入实验界面设置相关参数开始正常实验。
此方法适用于：当样品极性中等，需要添加甲醇/乙腈等有机试剂才能洗脱时且在高水相下不会析出时可以用此种方法。
此方法不适用于：样品在抽进色谱柱的过程中因为纯水没有洗脱能力，因此样品会被吸附在色谱柱中不会被洗脱下来，所以大极性样品不适合此种方法。
图3 未后处理样品上样方法
前沿科研成果报道
试用 | 定制 | 应用 | 售后
CN ▼
400-662-9158
在线购买
ChemBeanGo®化学知识共享平台
CBG在线商店