1、基质参数包括哪些，如何选择？

基质参数包括基质的形状、粒径以及孔径等，这些参数要结合纯化方面的具体需求进行选择。

以应用最广泛的硅胶基质为例，应用于制备纯化方面的硅胶基质通常分为球形和无定型两种。无定型硅胶价格低廉，是初步粗纯的首选。与无定型硅胶相比，球型硅胶优势非常明显，具有以下优点：颗粒均一性好，装填后柱床稳定不容易塌陷，多路扩散效应低，柱效高，分离度好。但其价格稍微昂贵一点，一般应用在精制纯化阶段。

基质粒径大小直接影响柱效和分离效果，越小的粒径所能达到的柱效越高，而选择粒径要具体看样品的分离状况，毕竟制备要考虑成本问题，越小粒径的固定相价格越昂贵，为了达到最好的柱效通常越小粒径选择的线流速就越大，所以背压越高，对仪器要求也高。一般粗纯的时候多选择大颗粒固定相，而当样品附加值高，要求高纯度和高得率的情况下，大多选择小粒径固定相。所以选择固定相粒径要从成本、样品以及纯化设备参数等方面综合考虑。

基质孔径的选择主要是从样品的分子体积去考虑（表1总结了样品分子量、样品分子直径以及推荐孔径之间的关系），固定相的孔径通常要大于样品分子体积的三倍，才能使样品分子有效进入固定相孔内进行充分的接触达到分离效果。但是对于多肽类样品分子而言，由于其分子结构呈长链状，因而固定相的孔径不必满足上述规律。同时孔径还与比表面积有关，其他参数一样的情况下孔径越小比表面积越大，而比表面积的大小在一定程度上影响分离效果和上样情况，通常比表面积大代表表面修饰的基团多，那么分离效果就越好，载样量也越大。

2、柱体积（CV）是什么？

很多时候，我们会误以为柱体积是空色谱柱所能填装的体积大小，CV其实更重要的地方是在我们增大载样量的时候，发挥着至关重要的作用，它并不是代表空色谱柱的装填体积，而是填充完填料之后，色谱柱内部还剩余的体积大小，包括内部孔径缝隙和颗粒之间的外部空隙体积。

3、分离柱柱壳使用的材质，是否含有塑化剂？

聚丙烯柱体，普通硅胶/氟胶密封圈，无塑化剂成分，可放心使用。

4、SepaFlash标准型快速分离色谱柱上样量问题？

上样量范围为硅胶量的1/10~1/1000,首次上样量建议为1/500，再次上样根据实际分离情况进行调整。

5、SepaFlash标准型快速分离色谱柱能不能反复使用？

硅胶柱是易耗品，用完即可固废丢弃处理，建议一次性使用，但如果想二次甚至三次使用，建议每次分离完成后，用大比例强极性的有机溶剂进行及时清洗，建议在3倍柱体积左右，以分离柱表观无颜色、紫外检测读数趋于基数（平缓）为参考依据，停止清洗，将其保存在异丙醇体系中，两端加上保护套，低温保存。

6、为何要进行润柱？润柱进行到什么程度可以？

①润柱是为了提前使分离柱进入分离状态进行的预平衡，且润柱时会放热，对于温度敏感的样品会引起样品性质不稳定。

②润柱至分离柱整体状态浸润（呈透明状），通常3~5个柱体积即可润湿。在润柱过程中我们有时候发现分离柱存在无法完全润湿的现象，这属于正常现象，不影响实际的分离实验。

对于220g以上的大尺寸分离柱，预平衡过程中热效应明显。在预平衡过程中，建议将流量设置为建议流量的50-60%，以避免明显的热效应。

混合溶剂的热效应比单一溶剂明显。溶剂系统以环己烷/乙酸乙酯为例，建议在预平衡过程中使用100%环己烷。当预平衡完成后，可以根据预设的溶剂系统进行分离实验。

＊当使用低沸点的溶剂作为流动相时，热效应会更加明显，如二氯甲烷、石油醚等。

＊ 当使用高粘度的溶剂作为流动相时，热效应会更加明显，如环己烷、异丙醇等。

8、为什么预装柱接头漏液？

一般为使用其他品牌的机器时出现，主要是由于柱子接口与机器柱架接口接触不良导致。请在安装柱子时转一转柱子，压一压柱架，通常就能解决问题。

9、液体上样方法？

样品溶解性好，易溶于洗脱能力弱的溶剂，优先选择液体上样模式；当样品溶解性不好，只能溶于强洗脱能力溶剂时，优先选择固体上样模式。

尽量选择洗脱能力弱的溶剂对样品进行稀释，并且稀释体积尽量小，控制在所使用分离柱的10%柱体积以内。例如使用正己烷/乙酸乙酯作为流动相进行分离，尽量选择正己烷去稀释样品，如果无法完全溶解可适当增加乙酸乙酯比例。

10、固体上样方法？

固体上样是将待纯化样品装填到柱上的一种方法，尤其是低溶解度的样品。在这种情况下，iLOK分离柱是非常合适的选择。

通常，样品溶解在合适的溶剂中，然后吸附在固体吸附剂上，固体吸附剂包括硅藻土、硅胶或其他材料。去除/蒸发溶剂后，将吸附在固体吸附剂上的样品倒入iLOK空柱中，保证样品截面平整，在样品表面铺一层硅胶或石英砂、棉花覆盖。

11、使用过的柱子，填料为什么会裂开，晃动？

柱子使用后放置一段时间出现填料坍塌/晃动属于正常现象，系由于柱管长时间接触溶剂导致柱管轻微溶胀，以及小颗粒硅胶下沉等原因导致。但标准系列正相硅胶柱为一次性使用产品，所以不会对分离造成影响。

12、分离柱末端有可能断裂在底座内？

冬季室温较低，Flash分离柱因其加工材质为聚丙烯故而会变得较脆，拆卸分离柱时若用力猛地一下从底座上拔下时，分离柱末端有可能断裂在底座内。

正确方式为：轻轻地将分离柱逆时针方向选择半圈或一圈，然后向上轻轻拔出分离柱即可。

PS：若分离柱或上样柱卡在了柱架头上，也可用此方法取下。

PPS：万一发生了分离柱末端断裂在柱架头或底座上这种情况，可以利用带有钩针的小工具，将末端小钩勾住断裂的分离柱末端，然后稍用力向外提起钩针，即可将断裂的分离柱末端取出。

13、硅胶柱是否可以用甲醇体系？

对于正相硅胶柱建议使用流动相体系中甲醇含量不超过25%。

在硅胶分离柱上使用DMSO、DMF、THF或TEA等溶剂作为流动相时，建议其比例不超过5%。

14、是否可以适用于其他制备液相色谱系统吗？

色谱柱使用标准的鲁尔接口，可以适用于其它快速液相制备色谱系统，例如biotage、ISCO、Yamazen等。

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